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    毛細管電泳的使用方法介紹

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      毛細管電泳是以彈性石英毛細管為分離通道,以高壓直流電場(chǎng)為驅動(dòng)力,依據樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現分離的電泳分離分析方法。
      毛細管電泳的使用方法介紹:
     ?。?)按照儀器操作手冊開(kāi)機,預熱、輸入各項參數,如毛細管溫度、操作電壓、檢測波長(cháng)和沖洗程序等。操作緩沖液需過(guò)濾和脫氣。沖洗液、緩沖液等放置于樣品瓶中,依次放入進(jìn)樣器。
     ?。?)毛細管處理的好壞,對測定結果影響很大。未涂層新毛細管要用較濃堿液在較高溫度(例如用1mol/L氫氧化鈉溶液在60℃)沖洗,使毛細管內壁生成硅羥基,再依次用0.1mol/L氫氧化鈉溶液、水和操作緩沖液各沖洗數分鐘。兩次進(jìn)樣中間可僅用緩沖液沖洗,但若發(fā)現分離性能改變,則開(kāi)始須用0.1mol/L氫氧化鈉溶液沖洗,甚至要用濃氫氧化鈉溶液升溫沖洗。凝膠毛細管、涂層毛細管、填充毛細管的沖洗則應按照所附說(shuō)明書(shū)操作。沖洗時(shí)將盛溶液的試樣瓶依次置于進(jìn)樣器,設定順序和時(shí)間進(jìn)行。
     ?。?)操作緩沖液的種類(lèi)、pH值和濃度,以及添加劑[用以增加溶質(zhì)的溶解度和(或)控制溶質(zhì)的解離度,手性拆分等]的選定對測定結果的影響也很大,應照各品種項下的規定配制,根據初試的結果調整、優(yōu)化。
     ?。?)將待測供試品溶液瓶置于進(jìn)樣器中,設定操作參數,如進(jìn)樣壓力(電動(dòng)進(jìn)樣電壓)、進(jìn)樣時(shí)間、正極或負極進(jìn)樣、操作電壓或電流、檢測器參數等,開(kāi)始測試。根據初試的電泳譜圖調整儀器參數和操作緩沖液,以獲得優(yōu)化結果。而后用優(yōu)化條件正式測試。
     ?。?)測試完畢后用水沖洗毛細管,注意將毛細管兩端浸入水中保存,如果長(cháng)久不用應將毛細管用氮吹干,最后關(guān)機。
     ?。?)定量測定以采用內標法為宜。用加壓或減壓法進(jìn)樣時(shí),供試品溶液黏度會(huì )影響進(jìn)樣體積,應注意保持試樣溶液和對照溶液黏度一致;用電動(dòng)法進(jìn)樣時(shí),被測組分因電歧視現象和溶液離子強度會(huì )影響待測組分的遷移量,也要注意其影響。

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