貝克曼離心機分離生物大分子和亞細胞物質(zhì)的基本原理是根據它們在液體介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區帶,或者它們的密度不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開(kāi)。前者是沉降速度法,應用該法時(shí)液體介質(zhì)的大密度要小于樣品中小顆粒的密度,離心時(shí)選用高轉速和短時(shí)間;后者是沉降平衡法,應用該法時(shí)液體介質(zhì)的大密度要大于樣品中小顆粒的密度,超速離心機離心時(shí)選用較低轉速和較長(cháng)時(shí)間。實(shí)際操作有幾種形式:
1.差速離心這種方法是選擇不同轉速的離心,分別分離各個(gè)不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,在高速離心上清沉降中等顆粒,后超速離心上清沉降小顆粒。二手貝克曼超速離心機采用逐級提高離心力分離上情液的方法,把不同大小的顆粒分開(kāi)。
這種方法比較簡(jiǎn)單,方便。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,勢必提高轉速或延長(cháng)離心時(shí)間,這樣大小相近的顆粒也會(huì )沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。
2.速度區帶(或速度梯度)離心本法是將樣品放在一個(gè)連續的密度梯度液體上,二手貝克曼超速離心機通過(guò)離心,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開(kāi)來(lái)。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開(kāi)。但對密度不同、大小類(lèi)似的物質(zhì)則不易分離。